试剂盒组分中含有荧光染料,使用及保存过程中注意避光!为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作!DilinoleylDiI(细胞膜橙红色荧光探针)DiD(细胞膜红色荧光探针)DiR(细胞膜近红外荧光探针)CytoMBriteTM细胞膜红色荧光探针CellTrackerCM-DiI(细胞膜橙红色荧光探针)CellTrackerCM-DiI(细胞膜橙红色荧光探针)DiOPlus(细胞膜绿色荧光探针升级款)CytoMBriteTM细胞膜橙红色荧光探针Hoechst33258Hoechst33258染色液(即用型)Hoechst33342Hoechst33342染色液(即用型)DAPI(4,6-二脒基-2-苯,基吲哚二盐酸盐)DAPI染色液(即用型)PropidiumIodide(碘化丙锭,PI)EthidiumHomodimer-I(溴乙啡锭二聚体I,EthD-I)DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料7-AADOxazoleyellow(恶唑黄),1mMinDMSOCalceinAM(钙黄绿素AM)LuciferYellowCada,verine!
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产品介绍PMA是一种高亲和性的DNA结合染料,该染料本身具有微弱的荧光,但与核酸结合后可以发出更为明亮的荧光!它尤其与双链DNA具有高亲和性!PMA不具有细胞膜渗透性,因此可选择性地修饰膜受损的死细胞的DNA!PMA修饰的DNA经蓝光(~464nm)光解后,PMA上的光反应性叠氮基转化为高反应性氮烯自由基,与DNA结合位点附近的任何烃部分反应形成稳定的共价氮碳键,从而导致永,久性DNA修饰(图1).
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阳性对照可以使用活细胞的基因组DNA.为了验证PMA在测试样本中的有效性,可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct(dCt)变化!实验材料(自备)光源(用于PMA修饰DNA后的光解步骤)细菌基因组DNA提取试剂盒配套的qPCRMix试剂盒对应样本类型的有效qPCR引物实验步骤吸取10μL菌液于液体LB培养基,在细菌培养箱中培养过夜或更长时间,使细菌培养至对数生长期(OD600≈0);注:培养基类型及培养时间根据实验调整!
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该修饰过程会使DNA不溶,并使其在随后的基因组DNA提取过程中与细胞碎片一起丢失,进而阻碍死细胞中目标DNA的PCR扩增!残留在溶液中未结合的PMA,在强光照射下与水分子反应分解成无交联活性的羟胺化合物,使羟胺不再能够共价结合DNA,从而不影响PCR扩增.这个特性使得PMA可以通过实时定量PCR(qPCR)的手段,检测多种样本类型包括:细菌、生物膜、酵母、真菌、病毒和真核细胞;与qPCR、NGS、Sanger测序和LAMP技术相结合,广泛应用在食品和水安全和环境测试中!
建议稀释的几组基因组浓度在qPCR分析体系的范围内。以Ct值为纵坐标,细胞数为横坐标,制作标准曲线.计算实验样本的拷贝数:Ct=斜率*细胞数+y轴截距(y=mx+b)细菌数样本=(Ct–y轴截距)/斜率注:☆纯化过程中活细菌DNA未损失!示例:E.coli(uidA)图活/死大肠杆菌用25μMPMA孵育,然后光解。后提取gDNA,用uidA引物进行扩增!注意事项使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。