将PMA处理的样本室温置于摇床上，避光孵育10min，使染料与样本充分混匀！将样品曝光，可以使用蓝色或白色光源，照射时间需自行摸索！例如，可用60W的蓝光灯，照射15min!注：①若使用卤素灯，我们建议将PMA处理的样本管放在距离光源20cm处的冰块上。冰块应放在透明托盘中，调整光源使其直接指向样品，光解5-15min；②若直接用环境中获取的细菌进行实验，由于环境样本的复杂性或浑浊度，需适当延长光解时间。

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　　注：DNA提取步骤参考所用试剂盒的说明书!PMA的部分作用机制是通过沉淀从样品中去除PMA结合的DNA；因此，在提取基因组DNA时，各组应使用相同体积的基因组DNA洗脱液，进行体积归一化处理（死菌和活菌提取基因组DNA量不一致，因此两者浓度相差明显）.吸取10μL菌液于液体LB培养基，在细菌培养箱中培养过夜或更长时间，使细菌培养至对数生长期（OD600≈0)；注：培养基类型及培养时间根据实验调整!取活细菌两份，每份400μL，置于干净离心管中.

　　非LED灯（如卤素灯）可能会加热您的样本并对分析产生负面影响，照射时需要使用冰块对样品降温处理!样本可以在光解后冷冻保存！若在进行PMA处理光解之前冷冻样本可能会损坏细胞膜并产生假阴性结果.如需在检测之前冷冻样本，建议先进行预实验.PMA的部分作用机制是通过沉淀从样本中去除PMA共价修饰的DNA；因此，在提取基因组DNA时，需使用相同体积的基因组DNA洗脱液，进行体积归一化处理！阳性对照可以使用活细胞的基因组DNA!

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　　为了验证PMA在测试样本中的有效性，可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct(dCt)变化。实验材料（自备）光源（用于PMA修饰DNA后的光解步骤）细菌基因组DNA提取试剂盒配套的qPCRMix试剂盒对应样本类型的有效qPCR引物实验步骤吸取10μL菌液于液体LB培养基，在细菌培养箱中培养过夜或更长时间，使细菌培养至对数生长期（OD600≈0)；注：培养基类型及培养时间根据实验调整!取活细菌两份，每份400μL，置于干净离心管中。

　　 上海晅科生物科技有限公司，位于上海市奉贤区金海公路3265号14幢11545室。公司主营生物诊断试剂行业，如何了解{推广产品}产品信息详情请拔打热线：13671826025华。

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　　（建议）制备死细菌。若需要死细菌作为对照，可将活细菌放入水浴锅中95℃加热5min，或58℃加热3h，具体操作根据样本类型自行选择，即可获得死细菌!死细菌的后续操作同活细菌!AnnexinV-PE偶联物YF488TUNEL细胞凋亡试剂盒（绿色荧光）YF488TUNEL细胞凋亡试剂盒（绿色荧光）YF555TUNEL细胞凋亡试剂盒（橙红色荧光）YF555TUNEL细胞凋亡试剂盒（橙红色荧光）YF594TUNEL细胞凋亡试剂盒（红色荧光）YF594TUNEL细胞凋亡试剂盒（红色荧光）Cy3TUNEL细胞凋亡试剂盒Cy3TUNEL细胞凋亡试剂盒BiotinTUNEL细胞凋亡试剂盒BiotinTUNEL细胞凋亡试剂盒SuperViewTM488Caspase-3活细胞分析试剂盒SuperViewTM488Caspase-3活细胞分析试剂盒Oxazoleyellow/PI膜透性凋亡检测试剂盒Oxazoleyellow/PI膜透性凋亡检测试剂盒JC-1线粒体膜电位检测试剂盒JC-1线粒体膜电位检测试剂盒LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)细菌活力/毒性检测试剂盒细菌活力/毒性检测试剂盒YF488Click-iTEdU成像试剂盒（绿色荧光）两份活细菌，一份不用PMA处理，一份用25μMPMA处理（处理不同类型或不同来源细菌的PMA浓度需查阅相关文献）.

　　例如，可用60W的蓝光灯，照射15min.注：①若使用卤素灯，我们建议将PMA处理的样本管放在距离光源20cm处的冰块上.冰块应放在透明托盘中，调整光源使其直接指向样品，光解5-15min；②若直接用环境中获取的细菌进行实验，由于环境样本的复杂性或浑浊度，需适当延长光解时间.处理和未处理的活细菌5000×g，离心10min，去上清!根据样本类型选择合适的基因组DNA提取试剂盒，洗脱DNA时，各组样本使用相同的洗脱体积.