非LED灯(如卤素灯)可能会加热您的样本并对分析产生负面影响,照射时需要使用冰块对样品降温处理!样本可以在光解后冷冻保存!若在进行PMA处理光解之前冷冻样本可能会损坏细胞膜并产生假阴性结果!如需在检测之前冷冻样本,建议先进行预实验!PMA的部分作用机制是通过沉淀从样本中去除PMA共价修饰的DNA;因此,在提取基因组DNA时,需使用相同体积的基因组DNA洗脱液,进行体积归一化处理!阳性对照可以使用活细胞的基因组DNA.
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使用方法使用前注意事项PMA根据细胞膜通透性区分死菌和活菌。许多杀死细菌的方法,会导致细胞膜受损,因此适用于PMA检测!但有些方法,如紫外线照射,可能不会立即导致细胞膜破裂.因此,在选择PMA检测之前,需先进行文献检索和预实验确定是否适用于您选择的细菌类型和杀伤方法!PMA处理完细菌后需要进行光解,以使染料与死细胞DNA共价结合!光解操作可以使用蓝色或白色光源!一般来说,灯越亮,光解步骤的效率就越高。
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该修饰过程会使DNA不溶,并使其在随后的基因组DNA提取过程中与细胞碎片一起丢失,进而阻碍死细胞中目标DNA的PCR扩增!残留在溶液中未结合的PMA,在强光照射下与水分子反应分解成无交联活性的羟胺化合物,使羟胺不再能够共价结合DNA,从而不影响PCR扩增.这个特性使得PMA可以通过实时定量PCR(qPCR)的手段,检测多种样本类型包括:细菌、生物膜、酵母、真菌、病毒和真核细胞;与qPCR、NGS、Sanger测序和LAMP技术相结合,广泛应用在食品和水安全和环境测试中!
为了验证PMA在测试样本中的有效性,可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct(dCt)变化.YF488-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒AnnexinV-PE/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒AnnexinV-PE/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒AnnexinV-APC偶联物AnnexinV-APC偶联物AnnexinV-PE偶联物FITC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒FITC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒FITC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF647A-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF647A-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF647A-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒APC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒APC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒APC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒AnnexinV-PE/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒PMA(叠氮溴化丙锭),20mMinwater产品货号:XK4051产品规格:100μL产品参数外观:橙红色液体Ex(pH3)=464nm(beforephotolysis)Ex/Em(afterphotocrosslinkingtonucleicacid)=510/610nm分子式:C27H32Cl2N6分子量:515储存条件-20℃避光保存,有效期见外包装!
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(建议)制备死细菌.若需要死细菌作为对照,可将活细菌放入水浴锅中95℃加热5min,或58℃加热3h,具体操作根据样本类型自行选择,即可获得死细菌!死细菌的后续操作同活细菌.AnnexinV-PE偶联物YF488TUNEL细胞凋亡试剂盒(绿色荧光)YF488TUNEL细胞凋亡试剂盒(绿色荧光)YF555TUNEL细胞凋亡试剂盒(橙红色荧光)YF555TUNEL细胞凋亡试剂盒(橙红色荧光)YF594TUNEL细胞凋亡试剂盒(红色荧光)YF594TUNEL细胞凋亡试剂盒(红色荧光)Cy3TUNEL细胞凋亡试剂盒Cy3TUNEL细胞凋亡试剂盒BiotinTUNEL细胞凋亡试剂盒BiotinTUNEL细胞凋亡试剂盒SuperViewTM488Caspase-3活细胞分析试剂盒SuperViewTM488Caspase-3活细胞分析试剂盒Oxazoleyellow/PI膜透性凋亡检测试剂盒Oxazoleyellow/PI膜透性凋亡检测试剂盒JC-1线粒体膜电位检测试剂盒JC-1线粒体膜电位检测试剂盒LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)细菌活力/毒性检测试剂盒细菌活力/毒性检测试剂盒YF488Click-iTEdU成像试剂盒(绿色荧光)两份活细菌,一份不用PMA处理,一份用25μMPMA处理(处理不同类型或不同来源细菌的PMA浓度需查阅相关文献)。
为了验证PMA在测试样本中的有效性,可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct(dCt)变化.实验材料(自备)光源(用于PMA修饰DNA后的光解步骤)细菌基因组DNA提取试剂盒配套的qPCRMix试剂盒对应样本类型的有效qPCR引物实验步骤吸取10μL菌液于液体LB培养基,在细菌培养箱中培养过夜或更长时间,使细菌培养至对数生长期(OD600≈0);注:培养基类型及培养时间根据实验调整!取活细菌两份,每份400μL,置于干净离心管中!
从孵化器“引种子”到加速器“建苗圃”再到产业园“育森林”,开发区不断筑巢引凤,为新传感器企业发展打造了完整的成长路线图。目前,开发区已将创业园A座15000平方米专门定位于新传感器项目引进孵化,创智园15万平方米中的5万平方米专门定位于传感器项目加速和招商。同时,开发区还在芙蓉大道以北、长山大道两侧整体规划建设1.16平方公里的新传感器产业园,统筹布局、统一设计长山大道1公里路段两侧建筑载体,突出研发孵化、加速、产业化、专家公寓、商务配套五大功能,并预留部分功能用地。其中,长山大道西侧新潮集团850亩土地建设物联网科技产业园,上马五大新项目,打造新传感网产业集聚区。