为了验证PMA在测试样本中的有效性,可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct(dCt)变化.YF488-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒AnnexinV-PE/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒AnnexinV-PE/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒AnnexinV-APC偶联物AnnexinV-APC偶联物AnnexinV-PE偶联物FITC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒FITC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒FITC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF647A-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF647A-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF647A-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒APC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒APC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒APC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒AnnexinV-PE/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒PMA(叠氮溴化丙锭),20mMinwater产品货号:XK4051产品规格:100μL产品参数外观:橙红色液体Ex(pH3)=464nm(beforephotolysis)Ex/Em(afterphotocrosslinkingtonucleicacid)=510/610nm分子式:C27H32Cl2N6分子量:515储存条件-20℃避光保存,有效期见外包装.
例如,可用60W的蓝光灯,照射15min!注:①若使用卤素灯,我们建议将PMA处理的样本管放在距离光源20cm处的冰块上。冰块应放在透明托盘中,调整光源使其直接指向样品,光解5-15min;②若直接用环境中获取的细菌进行实验,由于环境样本的复杂性或浑浊度,需适当延长光解时间!处理和未处理的活细菌5000×g,离心10min,去上清!根据样本类型选择合适的基因组DNA提取试剂盒,洗脱DNA时,各组样本使用相同的洗脱体积.
产品介绍PMA是一种高亲和性的DNA结合染料,该染料本身具有微弱的荧光,但与核酸结合后可以发出更为明亮的荧光!它尤其与双链DNA具有高亲和性。PMA不具有细胞膜渗透性,因此可选择性地修饰膜受损的死细胞的DNA!PMA修饰的DNA经蓝光(~464nm)光解后,PMA上的光反应性叠氮基转化为高反应性氮烯自由基,与DNA结合位点附近的任何烃部分反应形成稳定的共价氮碳键,从而导致永,久性DNA修饰(图1)。
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注:DNA提取步骤参考所用试剂盒的说明书!PMA的部分作用机制是通过沉淀从样品中去除PMA结合的DNA;因此,在提取基因组DNA时,各组应使用相同体积的基因组DNA洗脱液,进行体积归一化处理(死菌和活菌提取基因组DNA量不一致,因此两者浓度相差明显)!吸取10μL菌液于液体LB培养基,在细菌培养箱中培养过夜或更长时间,使细菌培养至对数生长期(OD600≈0);注:培养基类型及培养时间根据实验调整.取活细菌两份,每份400μL,置于干净离心管中!
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为了验证PMA在测试样本中的有效性,可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct(dCt)变化!实验材料(自备)光源(用于PMA修饰DNA后的光解步骤)细菌基因组DNA提取试剂盒配套的qPCRMix试剂盒对应样本类型的有效qPCR引物实验步骤吸取10μL菌液于液体LB培养基,在细菌培养箱中培养过夜或更长时间,使细菌培养至对数生长期(OD600≈0);注:培养基类型及培养时间根据实验调整。取活细菌两份,每份400μL,置于干净离心管中!
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(建议)制备死细菌!若需要死细菌作为对照,可将活细菌放入水浴锅中95℃加热5min,或58℃加热3h,具体操作根据样本类型自行选择,即可获得死细菌!死细菌的后续操作同活细菌!AnnexinV-PE偶联物YF488TUNEL细胞凋亡试剂盒(绿色荧光)YF488TUNEL细胞凋亡试剂盒(绿色荧光)YF555TUNEL细胞凋亡试剂盒(橙红色荧光)YF555TUNEL细胞凋亡试剂盒(橙红色荧光)YF594TUNEL细胞凋亡试剂盒(红色荧光)YF594TUNEL细胞凋亡试剂盒(红色荧光)Cy3TUNEL细胞凋亡试剂盒Cy3TUNEL细胞凋亡试剂盒BiotinTUNEL细胞凋亡试剂盒BiotinTUNEL细胞凋亡试剂盒SuperViewTM488Caspase-3活细胞分析试剂盒SuperViewTM488Caspase-3活细胞分析试剂盒Oxazoleyellow/PI膜透性凋亡检测试剂盒Oxazoleyellow/PI膜透性凋亡检测试剂盒JC-1线粒体膜电位检测试剂盒JC-1线粒体膜电位检测试剂盒LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,EthD-1)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)LiveDeadTM动物细胞活力/毒性检测试剂盒(CalceinAM,PI)细菌活力/毒性检测试剂盒细菌活力/毒性检测试剂盒YF488Click-iTEdU成像试剂盒(绿色荧光)两份活细菌,一份不用PMA处理,一份用25μMPMA处理(处理不同类型或不同来源细菌的PMA浓度需查阅相关文献).
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