其原理是利用混合液密度差来分离料液,比较适合于分离含难于沉降过滤的细微粒或絮状物的悬浮液!离心机是一种利用电机高速旋转产生离心力场,根据不同物质之间密度、形状、大小等方面的差异,对悬浮液中混合的不同颗粒或乳浊液中密度不同且互不相溶的液体进行分离和提取的仪器设备,广泛应用于生物学、医学、化工等领域!利用离心机对样品进行分离、纯化和提取的技术称为离心分离技术!常用的离心技术包括:沉淀离心、差速离心、密度梯度离心、分析超速离心、离心淘洗、区带离心及连续流离心等技术,其中沉淀离心、差速离心和密度梯度离心是实验室中常用的离心技术。
常用的密度梯度溶剂是蔗糖或氯化铯(CsCl)溶液。用蔗糖时,先将蔗糖溶液制成密度梯度溶液,再在其ding端加样品!离心后,如欲收集所分离的组分,可在离心管的下端刺一小洞,然后分部收集。如用CsCl这种密度大又扩散迅速的溶剂系统时,可将样品均匀地混合于溶剂中!离心达到平衡后,CsCl溶液形成密度梯度,样品中各组分也在相应密度处形成区带.概况离心技术是利用物体高速旋转时产生强大的离心力,使置于旋转体中的悬浮颗粒发生沉降或漂浮,从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离之目的。
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分析性超速离心机另装有光学系统,可以监测旋离过程中物质的沉降行为并能拍摄成照片!在操作技术上,zui常用的是差速离心和密度梯度离心!前者是交替使用低速和高速离心,用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法!此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。欲分离沉降系数接近的物质,则广泛使用密度梯度离心法!这种方法使用一种密度能形成梯度(在离心管中,其密度从上到下连续增高)又不会使所分离的生物活性物质凝聚或失活的溶剂系统,离心后各物质颗粒能按其各自的比重平衡在相应的溶剂密度中形成区带!
超速离心机zui初于1940年由瑞典物理化学家斯维德伯格(T!Svedberg)设计制造,经过不断改进,已成为现代生物化学和分子生物学常用的技术之一!应用非常广泛在超速离心机中,应用强大的离心力分离、制备、分析物质的方法.超速离心机的离心速度为每分钟60000转或更多,离心力约为重力加速度的500000倍,可分成制备性超速离心机和分析性超速离心机两大类.两者均装有冷冻和真空系统!制备性超速离心机容量较大,主要用于分离制备线粒体、溶酶体和病毒等以及具有生物活性的核酸、酶等生物大分子。
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其余技术均需要特殊的离心机或转头!差速离心法差速离心是根据颗粒大小和密度不同造成沉降速度(即沉降系数)的差异,通过分级提高离心转速或高速与低速离心交替进行,使具有不同质量的颗粒样品(或大分子)从混合液中分批沉降至管底,从而实现分离目的。该方法适用于混合样品中各沉降系数差别较大的组分之间的分离,更准确地说是沉降系数差别在1至几个数量级的混合样品的分离,差别越大,分离效果越好.简介超速离心沉降法是指利用离心力的作用将分散体系中的分散质点逐渐沉降,质点越大,沉降速度越大,系基于沉降速度与分子量依赖性的原理来测定高聚物分子量分布的方法.