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  • 更新日期:2021-08-14
产品说明

  虽然利用这种方法不一定能实现组分的纯化分离,但可以通过监测界面的移动来测定各组分的沉降速度!要想实现组分间的分离,必须在所需样品沉降之后停止离心过程!沉积的样品再悬浮到新的溶剂中,并以较低的速度离心使大颗粒的污染物沉降,而被纯化的样品留在溶液中,经过反复多次地离心才能得到纯的样品,这种方法就叫差示沉降离心法,它对细胞组分间的分离非常有用!也可以通过逐渐增大转速的方法实现不同组分间的分离!移动区带超速离心法差示离心法离心前各组分均匀分布在整个溶液中,所以分离一般不理想,而移动区带超速离心法是一种密度梯度(Dens心Gradient)离心技术,在离心之前离心管中溶液的密度不同(从上到下密度增大),梯度介质中zui大密度应小于样品物质的zui小密度,其特点是物质的分离取决于样品物质颗粒的质量.即样品物质的沉降系数,而不是取决于样品物质的密度,因而适合于分离密度相近而大小和形状不同的物质,这属于一种非平衡态分离法.

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  摩擦力的大小与颗粒的运动速度成正比,并且受颗粒的大小、形状及介质性质的影响:式中:f为颗粒在济剂中的摩擦系数.与颗粒的大小、形状及介质性质相关;v为颗粒的沉降速度.由于离心力的存在,颗粒将加速运动直到摩擦力与离心力相等!在这种情况下,颗粒所受到的净作用力为零,颗粒将以最大速度运动!式中Mp和Ms分别为颗粒的质量及等体积的溶剂的质量!上式中的Mp和Ms很难确定,为了建立分子大小与沉降系数之间的关系,引入了沉降系数这一新的概念.

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  储备液一般使用两种密度的蔗糖溶液或两种密度的氯化铯溶液来制备。样品一般铺在溶液的表面,然后开始离心!在实验方法上也可以采用平衡密度梯度法,在这种离心法中,介质的梯度不是预先配制,而是在离心过程中,由于离心力的作用而逐渐形成。样品物质和氯化铯的浓盐溶液充分混合均匀,离心开始之后,铯盐由于离心力的作用,自离心管口至离心管底形成连续递增的密度梯度.生物样品中不同组分物质在离心过程中沉降或上浮以寻找与自身密度相同的溶液密度梯度区带,不同的物质最终到达相应的区带,从而实现分离。

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  这种方法非常类似于电泳中的PH梯度等电聚焦方法,在离心时,颗粒依其密度的不同沉降或向上漂浮,直到移动到与自身的密度相同的溶剂梯度中为止,其结果是依样品物质密度的不同在梯度溶剂中形成一个个区带!在实验方法上可以采用预先制备密度梯度溶液的方法,一般先制备两种储备液,它们的浓度决定zui终所形成梯度溶液的极限!可以通过分步减小密度,从离心管底部到上部逐渐加液的方式形成不连续梯度溶液,也可以通过一个梯度混合器产生连续梯度密度!

  这种方法依赖于在离心场的作用下低分子量的铯盐密度梯度的形成,一般需要长时间的离心(2~3天)!显然,样品物质的密度应介于介质梯度中zui大和zui小密度之间,否则,样品将沉到离心管的底部或漂浮到溶液的顶层.离心zui大速度方法移动界面超速离心法含几个组分的样品在足够高的离心场中离心时,每种颗粒都达到其zui大沉降速度,这时样品开始分离!离心管的上层逐渐形成透明的上清液,并形成对应于样品各组分的一系列浓度界面,界面的移动相对于每种组分来说是特征的.

  离心力溶液中的固相颗粒做圆周运动时产生一个向外离心力,其定义为:F=mω2r式中:F为离心力的强度;m为沉降颗粒的有效质量;ω为离心转子转动的角速度,其单位为rad/s;r为离心半径(cm),即转子中心轴到沉降颗粒之间的距离!很显然,离心力随着转速和颗粒质量的提高而加大,而随着离心半径的减小而降低!离心力通常以相对离心力Fcf表示,即离心力F的大小相对于地球引力(G)的多少倍,单位为g,其计算公式如下:Fcf=119×105(h)2r×g可以看出,在同一转速下,由于f的不同,Fcf相差会很大,实际应用时一般取平均值。

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