每个泳道加5ul.5电泳：加样完毕，选择80V恒压进行电泳，电泳直至溴酚蓝染料前沿到达两胶交界处（一般约20分钟），更换至100V恒压电泳，电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处，即停止电泳（一般约为1小时20分钟）.主要成份：蛋白质是牛血清中主要成份！除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白，球蛋白.纤维粘连素细胞促进细胞附着；α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着；转铁蛋白能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用.

　　多肽血小板促生长因子能促细胞分裂，是多肽家庭的主要成员之一，是主要的促细胞增殖因子；成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，血清中含量虽很少，但对细胞生长也有一定作用。激素激素对细胞的作用是多方面的.胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关.类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用。促生长激素：促细胞增殖效应!其他成份氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。

　　牛血清白蛋白(bovineserumalbumin)简称BSA（标准级）分子量:66kDa等电点为47CAS号:9048-46-8牛血清白蛋白可用于酶联免疫、金（木示）、化学发光、放射免疫等诊断试剂盒中作为封闭试剂，以及生化研究实验中有广泛的应用;血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用载体作用和营养作用，在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白蛋白级别:生物化学级(forBiochemistry)牛血清白质白质量标准:序号检验项目检验标准1性状浅黄色，白色冻干粉末，无肉眼可见杂质2溶解性试验10%浓度，水中溶解时间，≤15分钟31%水溶液PH5-541%水溶液0D403≤0.

　　与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意义。作用BSA一般做为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低!加入BSA后，它可能起到“保护”或“载体”作用，不少酶类添加BSA后能使其活性大幅度提高.不需要加BSA的酶加入BSA一般不会受到什么影响!对多数底物DNA而言，BSA可以使酶切更完全，并可实现重复切割！在37℃，酶切反应超过1h时，BSA可以使酶更加稳定，因为在不含BSA的反应缓冲液中，许多限制性内切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的时间！

牛血清白蛋白封闭液配制

　　2预电泳：将聚合好的凝胶安置于电泳槽中，小心拔去梳子，加入电泳缓冲液后低电压10-20V的预电泳20-30min。（目的是清除凝胶内的杂质，疏通凝胶孔径以保证电泳过程中电泳的畅通）。3样品准备：首先计算上样体积，然后按样品：上样buffer=4：1的比例加入上样bufer混匀，沸水10分钟，冰上5分钟.4加样：预电泳后依次加入标准品（Marker）和待分析样品!（加样时间要尽量短，以免样品扩散，可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。

　　而BSA可以结合缓冲液或底物DNA中抑制限制性内切酶活性的金属离子和其它化学物质！用途：用于生化研究、遗传工程和医药研究用作医药保健食品、调味品维持渗透压、pH缓冲、载体作用在PCR体系中有助于Taq酶的稳定性及活性，可以提高PCR的效率。生产方法：以牛血为原料分离出血清，用硫酸铵分级沉淀后，经辛酸处理精制而得!应用：牛血清白蛋白（BSA）在生化实验中有广泛的应用,例如在WB实验中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用!

　　再分别以0、1120ul将蛋白标准液加入96孔板的1~8标准孔中，在其他样品孔中加入10ul待测样品.分别加PBS定容至20ul!各孔中加入200ulBCA工作液，室温放置2小时!用酶标仪测定蛋白浓度：测定A562，依标准曲线算出蛋白浓度.牛血清白蛋白（BSA）在缓冲液中作用：BSA是酶的稳定剂，防止酶的分解和非特异性吸附；BSA能减轻有些酶的变性，能减轻有些不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性的，可能是因为它结构中有17个二硫键，和一个巯基，巯基的化学反应很活泼，二硫键有抗氧化还原的作用，因此可与多种阳离子，阴离子和小分子结合；BSA能防止酶吸附到管壁而损失！