细胞冻存是细胞培养技术中细胞进行保种并长期保存的常用方法，其中细胞冻存液，作为细胞冻存时必须使用的一种溶液，不仅仅是说只是用来进行细胞的保存，在细胞的购买、寄赠、交换和运送过程中也起着关键作用，因此选择一款好的细胞冻存液就尤为重要。细胞冻存要取得好的效果，多采用血清、二甲基亚砜（DMSO）等作为保护剂，较大限度的保存细胞活力。这些物质有些能提高细胞膜对水的通透性，在缓慢冷冻过程中可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。同时，有些保护剂在细胞外也能减轻溶液中高浓度溶质对细胞的损伤，进一步避免细胞在冷冻和复苏过程中受到损伤。渗透性保护剂DMSO和非渗透性保护剂血清（主要含白蛋白）是使用广泛，效果稳定可靠的。此外，采用“慢冻快融”的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1到-2℃/分钟，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。复苏细胞采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。现有冻存方法存在的问题：1、DMSO对细胞存在一定的毒性，用量受到限制，降低或者不使用DMSO，寻找其它替代物是比较好的选择。2、血清，即使是纯化得到的白蛋白，由于其动物来源的特性，会增加带来病毒等感染物质的可能。而且，血清来源受限，价格昂贵，所以其使用也必然会受到越来越多的限制。因此，寻找替代血清的非渗透性保护剂也显得尤为必要。3、目前，成熟和稳定的冻存细胞技术是将加有保护剂的细胞悬液置于-196℃液氮中，这样可以使细胞暂时脱离生长状态而保持细胞的特性，在需要的时候经过复苏程序，使得细胞重新生长增殖以用于实验。细胞储存在-196℃液氮中，理论上储存时间是无限的，但是液氮冻存步骤繁琐，需要经过程序降温，如先将冷冻管置于4℃冰箱10分钟，然后移至-20℃冰箱30分钟，再移至-80℃冰箱保存16-18个小时（或隔夜），然后才移至液氮罐中进行长期的储存。（其中需要注意的是-20℃条件下不可超过1个小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量的死亡。）赛尔瑞成为解决以上问题，开发出一款无血清、无DMSO、无毒性、非程序降温、-80℃可长期冷冻保存的冻存液体系：CRD0无血清无DMSO细胞冻存液（货号：CF0301）。

重组人Fibronectin（重组人纤维连接蛋白，重组人纤连蛋白）简介重组人纤维连接蛋白片段（Recombinanthumanfibronectinfragment，以下简称Fibronectin）为一段人工重组蛋白，由574个氨基酸组成，分子量约为63kDa。重组人Fibronectin（重组人纤连蛋白）包括三个功能区：[1]C-Domain：细胞粘附区域，含RGD序列，又称细胞结合域（centralcell-bindingdomain）[2]H-Domain：提供病毒粘附，又称肝磷脂结合域（heparin-bindingdomain）[3]CS-1位点：提供细胞粘附功能重组人Fibronectin（重组人纤连蛋白）结构如下图所示重组人Fibronectin（重组人纤连蛋白）的应用：1.提高逆转录病毒、慢病毒的转染效率2.促进细胞黏连粘附及刺激细胞增殖3.能提高细胞的融合率，缩短融合周期等等赛尔瑞成提供高品质重组人Fibronectin（重组人纤连蛋白），是在符合GMP标准要求的洁净间由原核系统表达、经分离纯化和过滤除菌等步骤制成，分子量约为63.0kDa。该产品具有高纯度，高活性，低内毒素的特点，并通过ISO9001、ISO13485质量体系双重认证。重组人Fibronectin（重组人纤连蛋白）产品特点纯化自重组E.coli菌株，其中携带有编码人纤维连接蛋白片段的质粒无血清无动物来源内毒素水平：1EU/μg纯度：经SDS-PAGE电泳检测纯度95%生物学活性：在促进小鼠3T3细胞的粘附和增殖实验中，我公司生产的重组人Fibronectin表现出较好的促增值活性

赛尔瑞成重组蛋白定制服务包括：一、大肠杆菌原核表达重组蛋白制备；二、哺乳动物真核表达重组蛋白制备。一、大肠杆菌原核表达重组蛋白制备E.coli(大肠杆菌)作为一个用于重组蛋白生产的表达宿主菌，它不仅具有遗传背景清楚、培养操作简单、转化和转导效率高、生长繁殖快、成本低廉，可以快速大规格地生产目的蛋白等优点，而且其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统。利用原核系统进行重组蛋白的研发和生产是赛尔瑞成的优势之一，赛尔瑞成拥有丰富的E.coli蛋白表达、蛋白复性、蛋白纯化的经验，能为客户提供细胞因子、免疫用抗原、检测抗原、单链抗体、纳米抗体、信号通路蛋白、病毒样颗粒蛋白（VLP）等一系列蛋白的开发和制备工作。技术团队常年从事重组蛋白的开发工作，曾承担国家“863”计划“原核表达系统的研究及应用”课题，每年为客户提供200多种重组蛋白定制服务。赛尔瑞成E.coli(大肠杆菌)表达系统的优势15年大肠杆菌原核蛋白表达制备的经验三十多种特色表达载体、十多种个表达宿主菌可供选择多种蛋白复性、蛋白纯化技术GMP级，从5L到2000L发酵规模从基因设计到蛋白制备全流程服务二、哺乳动物真核表达重组蛋白制备哺乳动物细胞表达系统能够为重组蛋白提供更接近于天然状态的翻译后修饰，其表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面更接近于天然的高等生物蛋白质分子。赛尔瑞成提供CHO细胞和HEK293细胞为表达宿主的哺乳动物细胞表达服务，也可以采用客户的其它细胞系提供蛋白表达服务。哺乳动物细胞瞬时转染能在短期内快速表达高活性蛋白，满足蛋白制备的需求。赛尔瑞成哺乳动物细胞表达服务的优势从基因设计到蛋白制备全流程服务10多年哺乳动物细胞表达经验多种表达载体多种蛋白纯化方式

骨形态发生蛋白（Bonemorphogeneticprotein，BMPs）是转化生长因子β（TGF-β）超家族中的一员，继1965年Urist等学者从脱钙骨中提取出一类有助于成骨的蛋白成分之后，又陆续发现了多种骨形态发生蛋白，并发现了其促进成骨的作用。其中，人骨形态发生蛋白4（BMP4）作为BMPs家族成员之一，在空间结构上与BMPs大体结构有一致性，只有在成熟区序列方面有其特异性。BMP4在促进骨组织再生修复方面发挥着重要作用。此外，BMP4也与诱导胚胎分化、指导神经干细胞分化、调节肿瘤生长侵袭以及一些心脑血管疾病密切相关。BMP4前蛋白原由400-500个氨基酸组成，包括3个部分：N-末端信号肽、前蛋白折叠区和C-末端成熟肽。羧基末端成熟的BMP4蛋白可在Furin，PC6和PC7的作用下，从前蛋白原上切割下来，成为由116个氨基酸组成的具有高度保守性的BMP4分子。它的C-末端含有7个半光氨酸残基，其中6个形成3个分子内二硫键，称为半胱氨酸结，第7个半胱氨酸可发生糖基化，借此形成共价二硫键用于与另一个单体二聚化，从而形成生物活性信号分子。赛尔瑞成重组人BMP-4是由大肠杆菌原核表达系统制备的重组蛋白，是在符合GMP标准要求的洁净间内制备、质检、包装。该产品具有高纯度，高活性，低内毒素的特点，已广泛应用于细胞培养相关研究和工业化生产领域，并得到了大量客户的认可。同时，赛尔瑞成建立了完善的质量管理体系，通过ISO9001、ISO13485质量体系双认证，有效保障了重组细胞因子产品的高质量和可追溯性。

1960年Cohen从小鼠领下腺中发现了表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor，EGF)。1975年，Gregory第一次从人尿中分离得到人表皮细胞生长因子（humanepidermalgrowthfactor,hEGF），因为具有抑制胃酸分泌作用的物质，所以当时被称为胃抑素，后来研究发现胃抑素跟人表皮细胞生长因子是同一种物质。天然hEGF是由53个氨基酸组成的相对分子质量为6045的小分子多肽。生物学功能：人表皮细胞生长因子（hEGF）不仅对上皮细胞而且对许多类型细胞均有促增殖作用，是与细胞的生长及分化有关的重要生长因子。hEGF具有多种生物活性，主要表现在：①在体内刺激皮肤组织、角膜和气管上皮组织的生长繁殖；②加速角膜、皮肤等表皮创伤的修复；③抑制胃酸分泌；④促进人皮肤上皮细胞、角膜上皮细胞和哺乳动物上皮细胞生长；⑤增强表皮细胞的蛋白质、DNA和RNA的合成与细胞代谢；⑥诱导新生鼠眼睑的打开和萌牙；⑦对某些癌症的治疗具有一定疗效,等。hEGF有着广泛的应用前景，但天然的hEGF获得渠道却十分有限，由于产量问题的制约无法满足临床和实践的需求。而基因工程技术可以制备高产量、高活性的hEGF，大肠杆菌、酵母等是目前应用广泛的宿主菌。赛尔瑞成提供大肠杆菌表达系统制备的重组人EGF（RecombinanthumanEGF），是在符合GMP标准要求的洁净间内制备、质检、包装。该产品具有高纯度，高活性，低内毒素的特点，已广泛应用于细胞培养相关研究和工业化生产领域，并得到了大量客户的认可。同时，赛尔瑞成建立了完善的质量管理体系，通过ISO9001、ISO13485质量体系双认证，有效保障了重组细胞因子产品的高质量和可追溯性。

70年代中期，Gospodarowicz从脑垂体中纯化出一种细胞生长因子，因其能促进成纤维细胞增殖，故命名为成纤维细胞生长因子(fibrobastgrowthfactor，FGF)。进一步研究表明，FGF按等电点的不同，可分为碱性成纤维细胞生长因子(basicfibrobastgrowthfactor，bFGF)和酸性成纤维细胞生长因子(acidfibrobastgrowthfactor，aFGF)。bFGF的等电点为9.6，aFGF的等电点为5.6均为不含糖的肽类，有约56%相同氨基酸排列顺序。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在生物进化上具有很强的保守性，各种动物的bFGF都有很高的同源性。人和牛bFGF氨基酸序列同源性达98.7％。bFGF蛋白多肽链氨基末端的少许加长或缩短并不影响活性，其长度由118个氨基酸到155个氨基酸不等，等电点约为9.6，分子量为17～20KD。bFGF分子结构中有4个半胱氨酸，以此形成分子的三维空间结构。在科研和细胞大规模培养领域，bFGF目前是细胞培养添加的重要成分之一。但天然bFGF在组织中含量甚微，从组织中提取则成本高、产量低，因此目前均采用基因工程技术来制备高产量、高活性的bFGF。赛尔瑞成提供大肠杆菌表达系统制备的重组人bFGF（RecombinanthumanbFGF），是在符合GMP标准要求的洁净间内制备、质检、包装。该产品具有高纯度，高活性，低内毒素的特点，已广泛应用于细胞培养相关研究和工业化生产领域，并得到了大量客户的认可。同时，赛尔瑞成建立了完善的质量管理体系，通过ISO9001、ISO13485质量体系双认证，有效保障了重组人bFGF产品的高质量和可追溯性。

白介素-15（interleukin-15，IL-15）是一种T细胞生长因子，于1994年被两个独立的实验室发现，与IL-2具有类似的生物学功能。IL-15（白介素-15）主要由单核细胞和巨噬细胞产生。人体多种组织表达IL-15mRNA,如心、肺、肾、尤其是胎盘和肌肉。细胞来源和靶细胞分布较IL-2广，故可能在不表达IL-2的部位发挥类似IL-2的效应。IL-15的作用机制：IL-15Rα在人和小鼠中广泛表达，IL-15信号通路的主要机制是IL-15与细胞上的IL-15Rα亚基结合后，IL-15停留在细胞表面，与附近的效应NK细胞或T细胞上的IL-2R/IL-15Rβ-γc形成免疫突触，激活JAK1/JAK3和STAT3/STAT5途径、Syk激酶和磷脂酶C(PLC）γ、Lck激酶和Shc，导致PI3K/Akt和Ras/Raf/MAPK信号级联的激活。这些途径导致Bcl2、Myc和Fos/Jun和NFkB激活的后续表达。赛尔瑞成提供GMP级高品质重组人白介素15，是在符合GMP标准要求的洁净间内制备、质检、包装。该产品（重组人白介素15）具有高纯度，高活性，低内毒素的特点，已广泛应用于细胞培养相关研究和工业化生产领域，并得到了大量客户的认可。同时，赛尔瑞成建立了完善的质量管理体系，通过ISO9001、ISO13485质量体系双认证，有效保障了重组细胞因子产品的高质量和可追溯性。来源：人源表达宿主：E.coli氨基酸序列：MGNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSSGLEHHHHHH缓冲体系：50mMTris.Cl,1mMEDTA，pH8.5质量检测：纯度：经SDS-PAGE电泳检测纯度95%；生物学活性：用CTLL-2细胞进行剂量依赖增殖试验测定得到ED50小于1ng/ml；内毒素：小于1EU/μg；稳定性：样品在-20℃保存一年稳定。

传统的细胞冻存液是使用培养基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，统称为含血清细胞冻存液。含血清细胞冻存液的一般的冻存方法是梯度降温冻存法，如先将冷冻管置于4℃冰箱10分钟，然后移至-20℃冰箱30分钟，再移至-80℃冰箱保存16-18个小时（或隔夜），最后才移至液氮罐中进行长期的储存。（其中需要注意的是-20℃条件下不可超过1个小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量的死亡。）可见，含血清细胞冻存液冻存细胞时遇到的问题：1.冻存细胞时需现配冻存液(如购买市面上通用的含血清细胞冻存液，此步可省略)2.需要程序降温（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步骤繁琐，耗时耗力3.含血清，细胞污染(病毒、霉菌和支原体等)的风险更高4.血清批次、品质间差异导致冻存液的批次间差异5.需液氮冻存，且不能原位（如孔板）冻存CRD10无血清细胞冻存液是不含血清和动物源成分，含DMSO、糖类、氨基酸等成分的一款通用型细胞冻存液，适用于各种细胞类型的冷冻保存。CRD无血清细胞冻存液相对于传统含血清细胞冻存液的优势有：1.即用型，无需现配，直接将细胞悬浮于冻存液中即可；2.通用型，适用于冻存各种细胞系、原代细胞；3.无需程序降温，可直接放置-80℃冻存，操作简单；4.不含血清，大大减少细胞污染；5.因不含血清，批次间差异小；6.无需液氮，-80℃冰箱长期冻存；7.可培养板整板冻存，例如杂交瘤细胞冻存时可节省筛选过程。

Cellregen无血清细胞冻存液：是一种通用型的细胞冻存液，可用于冻存人和各种动物细胞株；非程序降温，-80℃低温冰箱冻存长达5年；特别配方（主要成分为DMSO和氨基酸）具有有效提高细胞冻存活率和复苏活力；不含动物来源性蛋白，能减少各类病毒、霉菌和支原体等的污染，确保冻存细胞安全；既适用于一般培养细胞的冻存，也适用于无血清培养细胞和蛋白表达细胞的冻存。Cellregen无血清细胞冻存液对比含血清细胞冻存液的优势：细胞冻存是细胞培养技术中细胞进行保种并长期保存的常用方法，其中细胞冻存液，作为细胞冻存时必须使用的一种溶液，不仅仅是说只是用来进行细胞的保存，在细胞的购买、寄赠、交换和运送过程中也起着关键作用，因此选择一款好的细胞冻存液就尤为重要。如果不加任何条件直接冻存细胞，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH值改变、蛋白变性等，从而引起细胞死亡。而细胞冻存液就相当于细胞的保护剂，在冻存细胞时将细胞悬浮于冻存液中，可使冰点降低，提高细胞膜对水的通透性，在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞，可以防止或减少冷冻冰晶对细胞的损伤作用。这样就使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要时直接复苏就可恢复细胞活性。传统的细胞冻存液是使用培养基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，统称为含血清细胞冻存液。含血清细胞冻存液的一般的冻存方法是梯度降温冻存法，如先将冷冻管置于4℃冰箱10分钟，然后移至-20℃冰箱30分钟，再移至-80℃冰箱保存16-18个小时（或隔夜），最后才移至液氮罐中进行长期的储存。（其中需要注意的是-20℃条件下不可超过1个小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量的死亡。）可见，含血清细胞冻存液冻存细胞时遇到的问题：1.冻存细胞时需现配冻存液(如购买市面上通用的含血清细胞冻存液，此步可省略)2.需要程序降温（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步骤繁琐，耗时耗力3.含血清，细胞污染(病毒、霉菌和支原体等)的风险更高4.血清批次、品质间差异导致冻存液的批次间差异5.需液氮冻存，且不能原位（如孔板）冻存Cellregen无血清细胞冻存液是不含血清和动物源成分，含DMSO、糖类、氨基酸等成分的一款通用型细胞冻存液。Cellregen无血清细胞冻存液的冻存方法是：将细胞冻存悬液（冻存管或孔板）直接放置-80℃冰箱长期保存。可见，Cellregen无血清细胞冻存液相对于含血清细胞冻存液的优势有：1.即用型，无需现配，直接将细胞悬浮于冻存液中即可2.通用型，适用于冻存各种细胞系、原代细胞3.无需程序降温，可直接放置-80℃冻存，操作简单4.不含血清，大大减少细胞污染5.因不含血清，批次间差异小6.无需液氮，-80℃冰箱长期冻存7.可培养板整板冻存，例如杂交瘤细胞冻存时可节省筛选过程