悬浮细胞转染试剂_细胞转染试剂

转染(transfection)是真核细胞主动或被动导入外源核酸片段（DNA或RNA）而获得新的表型的过程。转染后的细胞会产生重组蛋白，或者特异性的增强/抑制细胞中的基因表达。转染后的检测主要包括基因水平和蛋白水平的检测。一定时间后收集转染处理后的细胞，采用超声或酶解的方法破碎细胞，离心得到上清。针对基因水平，使用普通PCR或RT-PCR进行验证，蛋白水平，使用westernblot检测，简单，快速，准确。转染的类型根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短，可以分为瞬转和稳转。根据转染方式可以分为化学方法，生物方法，物理方法。瞬时转染是指将构建好的质粒或者siRNA通过某种方式导入到哺乳动物细胞内（常用的工具细胞HEK293细胞），该外源核酸片段不整合到细胞自身的基因组上。随着细胞的生长分（fen）裂，外源基因会逐渐丢失，在细胞内能够存在3-4天，无法随着细胞的分（fen）裂进入到子代细胞中。在这一段时间内，外源基因在细胞内发生转录翻译，得到少量的蛋白。根据使用的载体不同，收集目的基因/蛋白进行检测的时间不同，通常在转染后48h，目的蛋白的表达水平（zui）高。瞬时转染的特点是短时间内进行蛋白的小量制备，满足后续的实验要求。稳定转染是外源DNA整合到细胞基因组中，成为细胞基因组的一部分从而得以复制，随着细胞分（fen）裂，子代细胞也同样表达外源基因，这就是稳定转染细胞的标志。稳定转染是建立在瞬时转染的基础上的，先对细胞进行转染，再对得到的细胞池进行筛选，筛选标记是抗生素，荧光报告基团等，通常需要2-3周的筛选时间，由此形成稳定转染的细胞系。稳定转染的特点是能够得到蛋白的大量、长期生产，满足后续的一系列体内体外的表型实验。

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