FG空柱设计用于中高压层析系统进行中小规模的高分辨率层析。·耐压高，最高达30bar·塑料薄膜保护玻璃柱管的设计更加耐用·Lockingring能够保护柱床稳定性FK是一种新型的耐压达到20Bar的玻璃空柱，更加适合于新一代高流速填料如Capto™和MabSelect™系列。·耐受的压力更高，最高至20bar·设计的非旋转活塞装置可以轴向压缩装柱，不会引起连接管路打结·标配有两个柱头对装柱高度提供了较高的灵活性实验设计介质的选择离子交换介质首先要考虑目的分子的大小，因为目的分子会影响其接近介质上的带电功能集团，因此也会影响介质对目的分子的动力载量，从而影响其分离。对于大多数纯化步骤来说，建议从开始的阶段使用强离子交换柱，可在摸索方法的过程中有一个宽的pH范围。对于已知等电点的蛋白质，可根据其等电点来选择。而未知等电点的蛋白质，在实际操作中常采用这样的方法，先选择一个阴离子交换剂，再选择一个中性的pH缓冲液，将蛋白质样品透析至pH7.0，然后过阴离子交换柱。根据过柱后的结果确定下一个使用的缓冲液pH。流动相的选择离子交换色谱的流动相必需是有一定离子强度的并对pH有一定缓冲能力的溶液。为了避免目的蛋白失活，使用缓冲液可稳定流动相的pH，使之在色谱过程中不发生明显变化，同时可稳定目的分子上的电荷量，保证色谱结果的重要性。选择缓冲液一般按照以下原则：阳离子交换剂应选用阴离子缓冲液，可用柠檬酸盐、磷酸盐、醋酸盐、甘氨酸盐等；阴离子交换剂应选用阳离子缓冲液，可用烷基胺、Tris、氨基乙醇胺、***、咪唑等；起始缓冲液的浓度应尽可能低（100mmol/L）这样可以使色谱柱上更多的吸附分离物质；缓冲液应不含会影响被分离物质活性和溶解度成分，洗脱时尽量不采用pH梯度洗脱。色谱柱的选择离子交换色谱通常选用粗短柱，即高径比小的色谱柱。典型的离子交换柱高度在5~20cm，高径比一般小于5。如果需要增加离子交换剂的体积，只能从增加柱的直径而不能增加其高度。如果是连续梯度洗脱，可以适当增加柱的长度。案例介绍离子交换是蛋白纯化中的重要手段，即可以用于捕获阶段，也可以用于精纯阶段。预处理和装柱1.将超纯水与沉降胶按1:3比例悬浮，轻轻搅匀；2.将色谱柱固定到设备支架上，链接出口管道，从柱底端进口反向泵入超纯水，排除管道及筛板中的气泡，停泵，然后从出口端放出部分超纯水，保留1~2cm高度超纯水，封死出口端，然后正向冲洗进口端管道和适配器，排除筛板和管道中气泡；3.通过玻璃棒引流将悬浮胶导入色谱柱，在柱上端补充部分超纯水，搅匀，装上适配器；4.将柱出口端与色谱设备连接，以0.2MPa恒压装柱，装填至恒定的柱床高度，标记柱床胶面位置，关闭泵，松开适配器，降低适配器至胶面下2mm处，继续装填，待柱床高度稳定后，标记柱床胶面位置，降低适配器至柱上标记柱床位置下2mm。固定适配器，继续装填2~3柱体积；5.确定柱体积，测量柱高，计算柱体积及记录装柱时的最大流速；6.选择最佳线速，用0.5mol/LNaOH冲洗柱，冲洗3~5体积；7.接着用超纯水冲柱，冲洗10柱体积，至pH显示接近超纯水pH。柱的平衡20mmol/L磷酸盐缓冲液，pH6.5，用10柱体积平衡缓冲液平衡柱子，直至pH及电导率监控显示与平衡缓冲液的pH及电导一致。加样根据柱体积及装柱的最大流速确定上样流速，上样流速不超过装柱最大流速的75%，同时，上样流速也要尽可能低，保证样品和介质充分发生作用。洗脱上样结束后，用平衡缓冲液冲洗1~2柱体积，使UV280响应信号重新回到基线。之后用含有0.5mol/LNaCL的溶液洗脱，冲洗2~3柱体积，收集色谱峰。常见问题分析一、纯化后样品纯度不高怎么办？1.若目标蛋白和杂蛋白等电点差异较大，目标蛋白通过穿透步骤获得，通过调节起始缓冲液pH，使目标蛋白与填料之间的静电作用更强；若目标蛋白和杂蛋白等电点差异较小，目标蛋白通过洗脱步骤获得，过调节起始缓冲液pH，使目标蛋白与填料之间的静电作用更强；再调节洗脱溶液的离子强度和pH，使目标蛋白与杂蛋白逐渐分离；选择合适的离子交换填料及粒径；柱没有经过起始缓冲液的充分平衡；降低洗脱流速；调整样品溶液黏度。二、纯化后的蛋白收率较低怎么办？调整样品pH，使样品pH与起始缓冲液pH保持一致；改变洗脱模式，如将线性梯度模式改变为阶段性梯度洗脱；改变洗脱方法，如将pH洗脱方法改为盐梯度洗脱方法；改变洗脱强度。三、样品过于粘稠怎么处理？样品过于粘稠可能是由于含有的蛋白太多，或者含有大分子量的核酸分子，通常有以下解决方法：增加裂解前稀释细胞所用体积；增加裂解时间，直至黏度下降，或者增加DNase和Mg2+的剂量；增加机械裂解细胞的效率；降低上样流速。

1、简介：上海宸乔生物科技有限公司蛋白质是生命活动的物质基础，也是生物体内的功能性大分子。随着分子生物学、结构生物学、生物制药行业等研究的不断深入，蛋白质纯化成为近年来越来越热的研究话题。蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物的形式存在，不同类型的细胞中含有不同结构和功能的蛋白质，这就使得蛋白质纯化成为一项精细而复杂的任务。因此，高效的蛋白纯化技术和手段是蛋白质研究的基础和关键之一。蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段两个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如RNA、DNA等分开，常用的方法为硫酸铵沉淀法。精细纯化阶段的目的是把目的蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来，常用的方法有：凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析等。其中，凝胶过滤层析是最为常见的纯化手段之一。凝胶过滤（也称分子筛层析、排阻层析）是一种根据分子大小从混合物中分离蛋白质的方法。不同蛋白的形状及分子大小存在差异，在混合物通过含有填充颗粒的凝胶过滤层析柱时，由于各种蛋白的分子大小不同，扩散进入特定大小孔径颗粒内的能力也各异，大的蛋白分子会被先洗脱出来，分子越小，越晚洗脱，从而达到分离蛋白的目的。

1.树脂预处理。732树脂是强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂，新树脂在使用前，需进行予处理。将准备装柱使用的新树脂，先用70-80℃的热水（清洁的自来水即可）反复清洗。开始浸洗时，每隔约15分钟换水一次，浸洗时要不时搅动，换水4-5次后，可隔约30分钟换水一次，总共换水7-8次，浸洗至浸洗水不带褐色，泡沫很少时为止。也可用10％氯化钠溶液浸泡树脂24小时，然后用清水冲洗至洗水无色为止。2.酸处理。酸处理最好在交换柱中进行，先用湿法装柱法将树脂放入柱内。用1N**缓慢流过树脂，用量约为强酸阳树脂体积的2-3倍，每小时1.5倍床层体积流过。酸进完后，再浸泡1小时左右。然后用水冲洗，至出水PH为5左右为止。3.碱处理。用1NNaOH流过树脂，用量及流速与1相同。碱进完后，同样再浸泡1小时左右。然后用水冲洗，至出水PH为9左右为止。4.转型。若需用H型，则用1N**或**，将树脂转成H型，用量为树脂体积的3-5倍，流速与1相同。酸流完后，用去离子水冲洗至出水PH值为6以上时，即可投入使用。若用Na型，则不必转型，于碱处理完成后，即可投入使用。但冲洗树脂用水需用去离子水。5.再生。再生前，先将树脂反洗至出水无色透明。H型树脂用1NHCL、Na型树脂用1NNaoH（也可用8％的NaCL溶液）过柱，用量为柱脂体积的2－3倍，流速为每小时1倍床层体积。再生液过完后，用去离子水洗柱至出水至中性，即可再次投入使用www.keyanwang.net

层析柱分为普通层析柱和中压柱,普通层析柱耐压1-2bar中压柱耐压3-5bar并配转换接头，请亲们根据自己的需要选购哦。筛网一般使用300目筛网，即大约45微米左右，以上的填料都是可以使用的哦，如果填料的规格不符，还请联系我们，我们也备有420目以及230目的筛网~~~筛板一般使用20um，即大约30微米左右，以上的填料都是可以使用的哦，如果填料的规格不符，还请联系我们，我们也备有10um以及5um的筛板~~~

应用领域：天然产物，中间体等样品前处理，分离纯化，快速层析仪器简介：中压玻璃空柱根据客户使用情况自行装填，适用于客户样品的初步纯化，配中压泵使用能提高工作效率，达到小批量样品的处理。如化学合成样品，天然产物，以及生物样品的制备等。中压制备色谱的核心部件是玻璃分离柱。多选择性的中压柱为用户提供了极大灵活性，可满足各种需要。哪种中压柱可提供最佳结果取决于样品的性质和数量以及所需的选择性。汇通中压玻璃柱包含一系列柱型，它们在形式、规格和性能上有所不同。完全可以与进口（歩琪）中压玻璃柱相替代，与歩琪中压接头完全通用。柱内径(mm)柱长(mm)耐压(bar)装填硅胶质量(g)上样范围(g）建议流速(ml/min)1531040450.005-1.05-201546040700.01-2.05-2015920401400.019-3.85-2026310401300.015-3.820-7026460402000.030-6.020-7026920404000.060-12.020-7036310402400.045-6.020-7036460303500.055-11.045-13536920307000.110-22.045-13549310204500.065-13.080-20049460206500.130-20.080-200499202013000.210-42.080-20070310108800.150-25.0170-250704601013000.210-42.0170-250709201026000.420-85.0170-2501003101019000.250-45.0200-2501004601027500.425-85.0200-2501009201055000.860-170.0200-2501011040上样柱2610040上样柱4910030上样柱1兆帕(MPa)=145磅/英寸2(psi)=10巴(bar)=9.8大气压(atm)产品特点：1、独特的喇叭口柱头优于传统的筛板设计，基于拌样原理使样品分配更均匀，有效加大上样量，提高分离效率。上样量至少是普通高压相同型号HPLC制备柱的5倍。2、以独特的专利喷头代替筛板，特别是固体上样，可有效防止高流动相线速对柱床的破坏。3、以内衬玻璃管的不锈钢夹套代替传统的六通阀定量环，特别有利于高浓度的样品的分离制备，彻底消除了高浓度样品阻塞阀接口的现象。4、特质的柱管玻璃，具有可以与不锈钢材质媲美的功效。通过转接头耦合色谱柱与泵系统，能够完成从低压到高压的色谱制备操作。5、装填35微米C18填料，一套系统即可完成95%以上的各类有机化合物的日常分离纯化工作。6、装填40-50微米的C18填料，是药物杂质富集分离的首选。在1小时内就可以解决10-100毫克药物杂质的捕获目标。7、人性化柱管设计，使操作者更容易自己拆洗填料，极大的降低分离硬件成本。8、速度快，成本低，操作简单，功能强大，造型新颖等特征，将带给操作者高的工作效率和愉悦的心情。9、特别地，玻璃的透明属性，可以使操作者直观了解天然提取物、色素等带有颜色样品的分离状况，使工作更具有成就感。