Blockmembraneforonehouratroomtemperature(RT)！IncubateblotwithprimaryantibodyforonehouratRTwithgentleagitation。WashblotwithPBS-TorTBS-T:1×quickly.1×15min,with0.7ml/cm2membraneeachtime.incubateblotwithsecondaryantibodyforonehouratRTwithgentleagitation!

　　electrochemiluminescence化学发光试剂，一般是WesternBlot的最后一步，加入1：1的溶液A和溶液B，覆盖pvdf膜，可以显色来观察实验结果.原理：一般使用的发光液A和B分别是鲁米诺和过氧化氢，在辣根过氧化物酶（HRP）的催化作用下，鲁米诺与过氧化氢反应生成一种过氧化物，过氧化物不稳定随即分解，形成一种能发光的电子激发中间体，当后者由激发态返回至基态，就会产生荧光。在发光过程中不需要消耗HRP,HRP只是起催化作用，所以只要HRP没降解失活，是可以重复加发光液的.

高敏ECL发光

　　（例如，对于7×9cm的印迹，将至少1ml每种成分混合，以获得3ml工作试剂!）从试剂中取出膜，并将其放置在提供的背景猝灭片上！用膜垂直握住片材几分钟，排出多余的试剂!将带有污点的塑料板放在CCD成像仪和图像中!如果需要很长时间的曝光来检测弱带，或者如果使用X射线胶片进行成像，请用塑料薄膜覆盖湿斑.www.zeta-life！comTMZETALIFE310208WesternLumaxLightTMSuperior310209WesternLumaxLightTMSuperior310212WesternLumaxLightTMEnhance310231WesternLumaxLightTMSirius-MoresensitivesignalthanThermoECLorPierce™SupersignalECL。

　　D、极低丰度的蛋白检测（微量磷酸化、小分子）—同一张膜通过310208/310231相同时间曝光；—310231系列更加完好的灵敏度；—31020310231系列完好搭配，所有难易蛋白轻松检测.做western-blot实验时，选择一款好的发光液对实验的成功很重要，否则很容易发生各种问题，如淬灭，背景高，不灵敏，发光时间短等。比如淬灭，我觉得WesternBlot“淬灭”的原因主要在两方面：含HRP的抗体和发光试剂。

　　-Perfectperformanceforx-rayfilmimagingandCCDimaging.-Detectingpetagramproteinamounts。-Signalwillbelastto2hours!WESTERNLUMAXLIGHTWesternLumaxLightTMProtocolPrepareyourproteinblotoneitherPVDFornitrocelluloseusingyourstandardtechnique!