2）用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清!3）再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清。b)贴壁细胞：1）吸出细胞培养液至离心管中，PBS洗涤贴壁细胞一次，加入适量不含EDTA的胰酶细胞消化液消化细胞！2）室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液.需避免胰酶的过度消化。3）加入以上步骤中收集的细胞培养液，稍混匀，转移到离心管内，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清!

　　对于贴壁生长的细胞，由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤，会造成较高的假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测，可将胰酶消化后的细胞保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤!尽管目前，包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞！我不推荐用该方法检测！因为其重复性较差，且需要操作时非常小心!消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解AnnexinV-FITC，最终导致染色失败!细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品!

武汉悬浮细胞凋亡检测方法有哪些

　　 如果您想咨询细胞凋亡检测更多信息，请致电华伟：19126518388；珍惜与每个对Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒有需求的企业、个人 能有进一步的交流机会，欢迎各大企业、个人光临公司本部，深圳市安培生物科技有限公司详细地址：深圳市宝安区新安街道宝民社区创业二路5号建设银行楼创业二路5-1。

　　注：加入的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶；残留的胰酶会消化并降解后续加入的AnnexinV-FITC导致染色失败.4）用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清!5）再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清.用去离子水按1：4稀释BindingBuffer（4mlBindingBuffer+12ml去离子水）；用250ul结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml；取100ul的细胞悬液于5ml流式管中，加入5ulAnnexinV-FITC，轻轻混匀；室温(20-25℃)避光孵育10min；上机前5min加入10ul碘化丙啶溶液，轻轻混匀；上机前在反应管中补加400ulPBS重悬细胞，避光保存，随即进行流式细胞仪（FACS）检测，AnnexinV-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光！

　　因此AnnexinV被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒将AnnexinV进行绿色荧光（FITC）标记，以标记了的AnnexinV作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生!碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红!

　　试剂盒组份：Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号：FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号：PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号：BU002/4ml/10ml/20ml/4°C所需实验器材：微量移液器；PBS；不含EDTA的胰酶消化液；低速离心机；流式细胞仪注意事项：此试剂盒仅供研究使用!