05MPH牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml！在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜！次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟！（简称洗涤，下同）!加样：加一定稀释的待检样品0。1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤!（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）！加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0。1ml!

　　TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色！颜色的深浅和样品中的大鼠叶酸(FA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠叶酸(FA)浓度！人成纤维细胞生长因子(FGF)ELISA试剂盒样本处理及要求：血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）!仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

　　仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心!尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）！仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心！胸腹水、脑脊液参照实行!细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集！离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清！检测细胞内的成份时，用PBS（PH2-4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右.通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份.

　　37℃孵育0.5～1小时，洗涤!加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0。1ml，37℃10～30分钟。终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0！05ml.牛血清白蛋白（BSA）0.1克加洗涤缓冲液至100ml或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用.上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司。公司酶科品牌ELISA试剂盒研发的种属涵盖：人，大鼠，小鼠，猪，牛，羊，兔，植物，农残类，鱼类等!

　　加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）.加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀！温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用！洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干!

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　　人成纤维细胞生长因子(FGF)ELISA试剂盒ELISA是酶联接免疫吸附剂测定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的简称.它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术!此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域.原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术.

　　由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性！在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法（图a）、用于检测抗原的双抗体夹心法（图b）以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法.操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:包被：用0。

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