若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性！操作步骤：标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第第二孔中分别加标准品100μl，然后在第第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第第六孔中，再在第第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第第六孔中各取50μl分别加到第第八孔中，再在第第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第第八孔中分别取50μl加到第第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉.

　　由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性.在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法（图a）、用于检测抗原的双抗体夹心法（图b）以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等!比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法！操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:包被：用0！

　　人成纤维细胞生长因子(FGF)ELISA试剂盒ELISA是酶联接免疫吸附剂测定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的简称！它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术!此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域！原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术！

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　　加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔!在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）！加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀！温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟！配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干！

　　离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清!保存过程中如有沉淀形成，应再次离心！组织标本：切割标本后，称取重量!加入一定量的PBS，PH4！用液氮迅速冷冻保存备用.标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）！仔细收集上清.分装后一份待检测，其余冷冻备用！标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验!

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