加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干.

　　05MPH牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml!在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0！1ml，4℃过夜！次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟!（简称洗涤，下同）!加样：加一定稀释的待检样品0!1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤!（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0。1ml！

　　37℃孵育0！5～1小时，洗涤.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟！终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml.牛血清白蛋白（BSA）0!1克加洗涤缓冲液至100ml或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10％使用!上海琛艺实业有限公司经过数年的努力发展已迅速成为集产品研发、生产、经营为一体的专业化生物工程公司.公司酶科品牌ELISA试剂盒研发的种属涵盖：人，大鼠，小鼠，猪，牛，羊，兔，植物，农残类，鱼类等。

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　　仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心！尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）.仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心！胸腹水、脑脊液参照实行。细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）!仔细收集上清!检测细胞内的成份时，用PBS（PH2-4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份！

　　离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清！保存过程中如有沉淀形成，应再次离心.组织标本：切割标本后，称取重量!加入一定量的PBS，PH4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度.加入一定量的PBS（PH4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分!离心20分钟左右（2000-3000转/分）！仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。