将样品曝光，可以使用蓝色或白色光源，照射时间需自行摸索！例如，可用60W的蓝光灯，照射15min。注：①若使用卤素灯，我们建议将PMA处理的样本管放在距离光源20cm处的冰块上.冰块应放在透明托盘中，调整光源使其直接指向样品，光解5-15min；②若直接用环境中获取的细菌进行实验，由于环境样本的复杂性或浑浊度，需适当延长光解时间.注意事项使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验！试剂盒组分中含有荧光染料，使用及保存过程中注意避光。

　　一般来说，灯越亮，光解步骤的效率就越高!非LED灯（如卤素灯）可能会加热您的样本并对分析产生负面影响，照射时需要使用冰块对样品降温处理！样本可以在光解后冷冻保存!若在进行PMA处理光解之前冷冻样本可能会损坏细胞膜并产生假阴性结果!如需在检测之前冷冻样本，建议先进行预实验.PMA的部分作用机制是通过沉淀从样本中去除PMA共价修饰的DNA；因此，在提取基因组DNA时，需使用相同体积的基因组DNA洗脱液，进行体积归一化处理.

　　为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作!死细菌的dCt取决于许多因素，包括：菌株系/细胞类型；细菌被杀死方式；PMA使用浓度；扩增序列长度!活细菌占比计算如果死、活细菌对照结果正常，可以进入样本中活细菌占比计算!计算样本的dCt值：转换dCt值为活细菌比例：计算活细菌的绝，对数量dCt样本=Ct(样本,PMA处理)-Ct(样本,PMA未处理)PMA抑制倍数=2（样本dCt）活细菌%=100/PMA抑制倍数如果想计算样本中活细菌的绝，对数量☆，需要用已知数量的目标菌的基因组DNA制作标准曲线.

　　试剂盒组分中含有荧光染料，使用及保存过程中注意避光。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作！DilinoleylDiI（细胞膜橙红色荧光探针）DiD（细胞膜红色荧光探针）DiR（细胞膜近红外荧光探针）CytoMBriteTM细胞膜红色荧光探针CellTrackerCM-DiI（细胞膜橙红色荧光探针）CellTrackerCM-DiI（细胞膜橙红色荧光探针）DiOPlus（细胞膜绿色荧光探针升级款）CytoMBriteTM细胞膜橙红色荧光探针Hoechst33258Hoechst33258染色液（即用型）Hoechst33342Hoechst33342染色液（即用型）DAPI（4,6-二脒基-2-苯，基吲哚二盐酸盐）DAPI染色液（即用型）PropidiumIodide（碘化丙锭，PI）EthidiumHomodimer-I（溴乙啡锭二聚体I，EthD-I）DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ5活细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料DRAQ7死细胞DNA染料7-AADOxazoleyellow（恶唑黄）,1mMinDMSOCalceinAM（钙黄绿素AM）LuciferYellowCada，verine!

染细胞PMA标准液说明书

　　阳性对照可以使用活细胞的基因组DNA！为了验证PMA在测试样本中的有效性，可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct(dCt)变化!实验材料（自备）光源（用于PMA修饰DNA后的光解步骤）细菌基因组DNA提取试剂盒配套的qPCRMix试剂盒对应样本类型的有效qPCR引物实验步骤吸取10μL菌液于液体LB培养基，在细菌培养箱中培养过夜或更长时间，使细菌培养至对数生长期（OD600≈0)；注：培养基类型及培养时间根据实验调整。