为了验证PMA在测试样本中的有效性,可对比同处理样本-/+PMA之间的Ct(dCt)变化.YF488-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒AnnexinV-PE/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒AnnexinV-PE/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒YF488-AnnexinV/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒AnnexinV-APC偶联物AnnexinV-APC偶联物AnnexinV-PE偶联物FITC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒FITC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒FITC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF647A-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF647A-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒YF647A-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒APC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒APC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒APC-AnnexinV/PI细胞凋亡试剂盒AnnexinV-PE/RedNucleusⅡ细胞凋亡试剂盒PMA(叠氮溴化丙锭),20mMinwater产品货号:XK4051产品规格:100μL产品参数外观:橙红色液体Ex(pH3)=464nm(beforephotolysis)Ex/Em(afterphotocrosslinkingtonucleicacid)=510/610nm分子式:C27H32Cl2N6分子量:515储存条件-20℃避光保存,有效期见外包装.
将PMA处理的样本室温置于摇床上,避光孵育10min,使染料与样本充分混匀.将样品曝光,可以使用蓝色或白色光源,照射时间需自行摸索.例如,可用60W的蓝光灯,照射15min。注:①若使用卤素灯,我们建议将PMA处理的样本管放在距离光源20cm处的冰块上!冰块应放在透明托盘中,调整光源使其直接指向样品,光解5-15min;②若直接用环境中获取的细菌进行实验,由于环境样本的复杂性或浑浊度,需适当延长光解时间。
产品介绍PMA是一种高亲和性的DNA结合染料,该染料本身具有微弱的荧光,但与核酸结合后可以发出更为明亮的荧光!它尤其与双链DNA具有高亲和性!PMA不具有细胞膜渗透性,因此可选择性地修饰膜受损的死细胞的DNA!PMA修饰的DNA经蓝光(~464nm)光解后,PMA上的光反应性叠氮基转化为高反应性氮烯自由基,与DNA结合位点附近的任何烃部分反应形成稳定的共价氮碳键,从而导致永,久性DNA修饰(图1).
注:DNA提取步骤参考所用试剂盒的说明书.PMA的部分作用机制是通过沉淀从样品中去除PMA结合的DNA;因此,在提取基因组DNA时,各组应使用相同体积的基因组DNA洗脱液,进行体积归一化处理(死菌和活菌提取基因组DNA量不一致,因此两者浓度相差明显)。吸取10μL菌液于液体LB培养基,在细菌培养箱中培养过夜或更长时间,使细菌培养至对数生长期(OD600≈0);注:培养基类型及培养时间根据实验调整!取活细菌两份,每份400μL,置于干净离心管中!
使用方法使用前注意事项PMA根据细胞膜通透性区分死菌和活菌!许多杀死细菌的方法,会导致细胞膜受损,因此适用于PMA检测!但有些方法,如紫外线照射,可能不会立即导致细胞膜破裂!因此,在选择PMA检测之前,需先进行文献检索和预实验确定是否适用于您选择的细菌类型和杀伤方法!PMA处理完细菌后需要进行光解,以使染料与死细胞DNA共价结合!光解操作可以使用蓝色或白色光源!一般来说,灯越亮,光解步骤的效率就越高!
叠氮溴化丙锭试剂
非LED灯(如卤素灯)可能会加热您的样本并对分析产生负面影响,照射时需要使用冰块对样品降温处理。样本可以在光解后冷冻保存。若在进行PMA处理光解之前冷冻样本可能会损坏细胞膜并产生假阴性结果!如需在检测之前冷冻样本,建议先进行预实验!PMA的部分作用机制是通过沉淀从样本中去除PMA共价修饰的DNA;因此,在提取基因组DNA时,需使用相同体积的基因组DNA洗脱液,进行体积归一化处理。阳性对照可以使用活细胞的基因组DNA.
我们推荐叠氮溴化丙锭试剂
病毒DNA/RNA提取试剂盒48T_核酸提取试剂盒吸附柱法_上海晅科生物科技有限公司
(建议)制备死细菌!若需要死细菌作为对照,可将活细菌放入水浴锅中95℃加热5min,或58℃加热3h,具体操作根据样本类型自行选择,即可获得死细菌。死细菌的后续操作同活细菌.两份活细菌,一份不用PMA处理,一份用25μMPMA处理(处理不同类型或不同来源细菌的PMA浓度需查阅相关文献)。将PMA处理的样本室温置于摇床上,避光孵育10min,使染料与样本充分混匀!将样品曝光,可以使用蓝色或白色光源,照射时间需自行摸索!
“B8502”采用了集测试功能成于一枚芯片的IC。由此,在可将4736个信号引脚和256个电源收纳在约1.0m3容积内的同时,还将耗电量降至4kVA。这样,在削减了设备投资和运行成本的情况下,还能够同时测量256个芯片。试验频率为66MHz,价格为7000万日元以上。“B8502ES”是用于“B8502”的工程师站。采用了使用了同一测试模块的PIN卡,并且使用了相同构造的插板。其结果,对从调试到量产能够提供相同的操作环境,无需改变开发部门编制的程序,即可直接作为量产用测试程序使用。价格为1200万日元以上。